![西方墨點法](https://i.ytimg.com/vi/rku0nfMc_YU/hqdefault.jpg)
内容
主要区别
Southern Blotting和Western Blotting之间的主要区别在于Southern Blotting是一种用于检测给定样品中特定DNA片段的技术,而Western Blotting用于查找给定样品中的特定蛋白质。
南方印迹 与 蛋白质印迹
印迹是科学家用来从混合物或样品中分离不同类型分子的技术。在这种技术中,混合物中的大分子(如核酸(DNA和RNA)和蛋白质)会穿过一块凝胶。在这里,微小的粒子将比较大的粒子移动得更快。这些分子被压在固定的膜的表面上,该膜将分子转移到膜上。根据特定材料的检测,有不同类型的印迹,即,Southern印迹,Northern印迹和Western印迹。 Southern印迹是用于检测DNA的印迹类型,而Western印迹是用于发现蛋白质的印迹类型。 Southern印迹是由Edward M. Southern于1975年开发的。因此,它被称为Southern印迹。另一方面,西方印迹法是由斯坦福大学的乔治·史塔克(George Stark)小组在1979年开发的。这个名称与南方印迹法相称。 Southern印迹法用于查找特定的DNA序列,而Western印迹法用于查找特定的氨基酸或蛋白质序列。
比较表
南方印迹 | 蛋白质印迹 |
用于发现给定混合物中特定DNA序列的技术称为Southern印迹。 | 用于发现给定混合物中蛋白质的特定氨基酸序列的技术被称为Southern杂交。 |
由开发 | |
Southern印迹是由Edward M.Southern在1975年开发的。 | 蛋白质印迹法是由斯坦福大学的乔治·斯塔克(George Stark)小组于1979年开发的。 |
检测类型 | |
Southern印迹法用于发现特定的DNA序列。 | 蛋白质印迹用于发现特定的氨基酸或蛋白质序列。 |
原理 | |
它按照杂交原理工作。 | 它基于免疫检测方法或抗原-抗体相互作用的原理。 |
探测 | |
单链DNA或有时将RNA用作探针。 | 一抗和二抗用作探针。 |
凝胶电泳 | |
琼脂糖凝胶电泳用于Southern印迹。 | SDS PAGE /聚丙烯酰胺凝胶用于蛋白印迹分析中的蛋白质分离 |
印迹程序 | |
Southern印迹法遵循毛细管转移程序。 | Western Blotting遵循电转移程序。 |
样品 | |
在Southern印迹过程中,样品需要变性。 | 在蛋白质印迹过程中,样品应处于原始状态。 |
封锁 | |
印迹分析没有涉及阻断的任何步骤。 | 在蛋白质印迹过程中,借助于奶粉或牛血清白蛋白(BSA),硝酸纤维素纸上的非特异性抗体位点被封闭。 |
贴标方法 | |
Southern印迹中常用的标记方法是使用生色染料或放射性标记或荧光标记等。 | 蛋白质印迹法中使用的标记方法是使用荧光标记的抗体或放射性标记,发色染料或二氨基联苯胺的形成等。 |
检测方法 | |
光的检测,放射自显影和颜色变化被用作Southern印迹法的检测方法。 | 蛋白质印迹的检测方法是颜色变化和光检测等。 |
应用 | |
Southern印迹用于DNA检测,亲子鉴定,DNA指法检测,受害者识别,犯罪分子识别,传染源查找以及突变或基因重排等。 | Western印迹法用于检测混合物中蛋白质的数量,检测血清中HIV,病毒和细菌等的存在,找出缺陷蛋白质,并用作疱疹,乙型肝炎,莱姆病的确定指标疾病和克雅氏病等 |
什么是DNA印迹?
Southern印迹是Edwin Southern所提供的最古老的印迹方法,因此被称为Southern印迹。它用于找出给定样品或混合物中DNA的特定序列。 Southern印迹过程中涉及的步骤是电泳,转移和检测特定序列。首先,借助特定的限制性内切酶将DNA片段化。然后通过凝胶电泳分离所需的DNA片段。这些片段在碱性溶液例如NaOH等的帮助下变性以分离两条DNA链。然后,这些单链DNA片段通过印迹过程转移到膜上。然后用标记的探针处理与膜结合的DNA。该探针将附着在膜DNA上的互补链上,可以通过放射自显影等方式观察。
什么是蛋白质印迹?
蛋白质印迹法是由斯坦福大学的乔治·史塔克(George Stark)小组发明的,用于鉴定蛋白质中特定的氨基酸序列。也称为蛋白质印迹或免疫印迹。 Western blotting的步骤是电泳,转移和检测特定蛋白质。首先,将混合物均质化。然后借助电泳分离目标分子。将这些分子转移到膜上,并通过使用特定的探针识别特定的蛋白质。
关键差异
- 用于发现给定混合物中特定DNA序列的技术称为Southern印迹,而用于发现给定混合物中蛋白质特定氨基酸序列的技术称为Southern印迹。
- Southern印迹由Edward M. Southern于1975年开发,因此被称为Southern印迹。另一方面,西方印迹技术是由斯坦福大学的乔治·斯塔克(George Stark)小组于1979年开发的。
- Southern印迹法用于发现特定的DNA序列。相反,使用蛋白质印迹法可以发现特定的氨基酸或蛋白质序列。
- Southern印迹法是在背面进行杂交的原理。免疫印迹法基于免疫检测方法或抗原-抗体相互作用的原理。
- 在Southern印迹的另一侧,单链DNA或有时在RNA中用作探针,在western印迹中,一抗和二抗用作探针。
- 琼脂糖凝胶电泳用于Southern印迹,而SDS PAGE /聚丙烯酰胺凝胶用于蛋白质印迹中的蛋白质分离。
- 另一方面,Southern印迹遵循毛细管转移程序。 Western Blotting遵循电转移程序。
- 在Southern印迹过程中,样品需要变性,而在Western印迹过程中,样品应处于天然状态。
- 在反面的Southern印迹中没有涉及阻断的任何步骤,在Western印迹期间,借助奶粉或牛血清白蛋白(BSA)在硝酸纤维素纸上阻断了非特异性抗体位点。
- Southern印迹中常用的标记方法是使用生色染料或放射性标记或荧光标记等,而Western印迹中使用的标记方法是使用荧光标记的抗体或放射性标记,生色染料或二氨基联苯胺的形成等。
- 在Southern印迹中,将光的检测,放射自显影和颜色变化用作检测方法,而在Western印迹中,检测方法是颜色变化和光检测等。
- Southern印迹法用于DNA检测,亲子鉴定,DNA指法检测,受害者识别,罪犯识别,寻找传染源以及鉴定突变或基因重排等。相反,Western印迹法则用于检测蛋白质中蛋白质的数量。混合物,以检测血清中的HIV,病毒和细菌等的存在,找出缺陷蛋白,并用作疱疹,乙型肝炎,莱姆病和克雅氏病等的明确测定。
结论
上面的讨论总结说,Southern印迹是用于发现样品中特定DNA片段的最古老的印迹技术,而后来发现Western印迹并用于鉴定氨基酸或特定蛋白质的特定序列。